четверг, 16 апреля 2020 г.

Как работает тест на вирус

картинка отсюда: ссылка

Тест на вирус сейчас проводят методом RT-PCR, инструмент для которого можно видеть на картинке справа. В этот инструмент закладываются пробирочки в которые помещают специальные (и очень дорогие) реагенты и сами образцы от пациентов. Образцы берут из смывов с палочек (по центру), а палочки - это то, чем лезут в рот или нос для забора материала на тестирование. Как видно, тестирование - многоэтапный процесс, и каждый шаг влияет на конечный результат.
Много критики получили Российские тесты, так как много ложноотрицательных, то есть тест говорит что вируса нет, когда он есть и человек уже заражен и может распространять заболевание. И тут важным критерием для оценки качества теста является его чувствительность: сколько вирусных частиц в одном микролитре образца возможно обнаружить. Для тестов от Российской компании "Вектор" заявленная чувствительность 100 частиц (из источника: https://pcr.news). Заявленные характеристики для зарубежных тестов выглядят лучше: 10 частиц на микролитр (ссылка на статью). Кажется, что пора кричать караул, в 10 раз наш тест хуже. Да, по показателю чувствительности тест хуже. Но дело в том, что и при лучшей чувствительности зарубежных тестов до 30% результатов могут быть ложноотрицательными. Сам RT-PCR тест, это шаги, которые проходят на этапе от пробирок к инструменту (см. Рис). А большинство ошибок при анализе идет на стадии пробоодбора и пробоподготовки. То есть, если все делать правильно, и понимая суть происходящих процессов, то и 100 копий на микролитр будет достаточно.
Например, для сдачи теста в Канаде не рекомендуют есть или пить за несколько часов то отбора пробы из горла, чтобы не уменьшить концентрацию вируса на поверхности. Материал палочек и состав раствора в пробирке куда помещают палочку после отбора пробы тоже важен, можно потерять до 90% образца если выбрать неподходящий набор. Время и условия транспортировки и хранения также важны, понятно, что образцы нужно охлаждать, но если они в обычном физрастворе, то вирус разваливается, а вот в дорогой питательной среде с ингибиторами может храниться многие дни. Потом можно вспомнить о качестве лабораторных пробирок и пипеток, их изготавливают из пластика, и для одних марок можно получить 90-99% того, что поместил в пробирку, а для других, увы, много меньше, часть образца теряется/прилипает на стенках.
То есть, взяли тест у человека без симптомов, который сошел с трапа самолета. А он, хоть и заразился, но еще не успел получить каких-либо значимых количеств частиц вируса на поверхности носоглотки, да еще и попил кофе перед посадкой, смыв последние остатки вируса. Забор мазка из горла провели ватной палочкой, и поместили ее в обычный физраствор: сразу потеряв на этом шаге большинство вирусных частиц. Сумка-холодильник для перевозки образцов была переполнена, и вместо +4, как положено, в центре сумки было +12, еще часть образца вируса потеряно за время перевозки, а так как тестов много, то анализировали его через 2 суток, опять потери. Затем, тест-набор включает реактивы только для последней стадии, а набор для выделения РНК и перевода в ДНК нужно использовать от сторонних фирм. Обычно западные фирмы. Но, из за простоев на таможне и сроков поставки в Россию, часто те же реактивы, что и на Западе, доезжают с нарушениями условий хранения (попросту не охлаждаются, или наоборт, замораживаются до льда, а потом размораживаются), опять качество пробоподготовки страдает. Пластиковую посуду: носики для пипеток и пробирки, по конкурсу вынуждены были закупить самую дешевую, а не ту, которая имеет низкое связывание с РНК, то есть, на стенках пластиковой посуды оставим еще половину образца. После этого, хоть западный тест, хоть Российский ничего не покажет, даже если человек заражен.
В общем, микроскопом не надо забивать гвозди. Есть супер-микроскопы, в 10 раз лучшей разрешающей способности, чем самый первый из 17-го века. Но Левенгук и на самом простом разглядел бактерии. Вирус не разглядеть в оптический микроскоп (только в электронный), а потому нужны методы молекулярной биологии, такие как RT-PCR. Но наличие самого выдающегося метода, самого чувствительного и быстрого, еще не гарантирует результата. Пробоотбор и пробоподготовку делают люди. А вот насколько грамотно они это делают, это и вопрос к министерству здравоохранения и к министерству образования, а в конечном счете к ответственным за бюджет, которые на этих статьях и экономят в первую очередь.

1 комментарий:

  1. Очень интересно! Наконец-то стало понятно. Как здорово, что Вы так подробно и понятно всё объяснили. Спасибо Вам огромное!

    ОтветитьУдалить